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化学药物对照品的标化方法

作者:小坛     发表时间:2018-11-23 22:01

  我国《药品管理法》第三十二条规定“国务院药品监督管理部门的药品检验机构负责标定国家药品标准品、对照品”。在2007年颁布的《药品注册管理办法》中进一步明确“中国药品生物制品鉴定所(已更名为中国食品药品检定研究院)负责标定国家药品标准物质”。

  对照品的定值过程是追求真值的过程,通过试验获得的量值,代表了对真值的最佳估计值。定值没有固定的方法,应选择在理论和实践上经检验证明为准确可靠的方法。

  目前,一级对照品的绝对含量测定多采用质量平衡法,该法也是世界卫生组织、多国药典及药品监管机构推荐的方法;另外,对照品绝对含量测定也可以采用核磁共振波谱法、容量分析方法等,并与质量平衡法相互验证,保证定值的准确度。二级对照品的赋值多采用量值传递法,即采用已知量值的一级对照品对其进行测定。

  1.质量平衡法

  质量平衡法的原理如下图所示,系根据待赋值对照品的组成,采用各种适用的分析测试技术测定出其中所含杂质(例如有机杂质、无机杂质、水和各种溶剂)以及与主成分成盐的离子的量,再计算出主成分绝对含量。

  WHO给出的对照品含量计算公式为:

  对照品含量% = 100% - 有机杂质% - 无机杂质% - 水分% -残留溶剂%

  其中,有机杂质采用HPLC 或DSC等分析方法定量。

  美国药典等采用下面公式计算:

  对照品含量% = ( 100% - 水分% - 有机溶剂% - 无机杂质% -其他杂质%) × 色谱纯度%。

  (1)色谱纯度测定色谱法是一种基于色谱分离技术的分析方法,包括HPLC,GC,TLC 等。HPLC法有多种不同类型的检测器可以选择,随着ELSD和CAD 等通用性检测器的广泛应用,针对无紫外吸收的有机物纯度检测具有特别的优势,是目前对照品标定中最常使用的色谱分离技术。HPLC 法一般采用面积归一化法计算色谱纯度,需要特别注意不同类型杂质的响应因子差异,必要时应进行校正。对于挥发性物质可采用GC 法进行纯度检测。TLC法相比HPLC和GC 法,灵敏度稍差,但其仪器简单,价格低廉,操作方便,可在微克水平进行试验,是验证鉴别用对照品纯度的良好方法。上述基于分离技术的纯度测定法,均应满足分离系统的系统适用性要求。

  动力学属性法是一组可以度量物质中总杂质的绝对含量方法,常见的有差示扫描量热法(DSC)和相溶度分析方法(PSA)。由于方法本身的局限性,如对照品熔融分解、分析过程形成固体溶液等,使其不能作为评估化学对照品纯度的通用方法。这一类方法的测定结果不参与对照品的量值计算和确定,但可以支持和确认采用分离技术所获得的数据。

  (2)水分测定对照品中的水分常用水分测定法( 卡尔费休库伦法或卡尔费休容量法) 或干燥失重法进行测定。对照品分子中可能存在结晶水,也可能存在吸附水,无论采用何种方法,均应保证对照品中的水分能够被准确测定。

  (3)残留溶剂测定一般采用GC 法对残留的有机溶剂进行准确测定。如果方法适用,也可以通过在规定条件下进行干燥失重或热重分析,获得水分和挥发性溶剂的总量数据。

  (4)无机杂质测定对于无机杂质最经典的方法是炽灼残渣检查,其通过测定灰化后的残渣量来计算无机杂质的总量。目前尚有原子吸收、ICP、离子色谱法等用于无机杂质的检查。如果无机杂质数据对对照品的纯度影响极微,这些痕量数据可不用于最终的对照品定值。

  2.容量分析法

  由于真值的不可知性,对照品标化时应考虑采用不同原理的方法进行互补验证。容量分析方法等属于高准确度的绝对含量测定方法,常用于质量平衡法的比较验证,这种方法的系统误差是可估计的,相对随机误差水平是可以忽略不计的。测量时,要求有2个或2个以上分析者独立地进行操作,并尽可能使用不同的试验装置,有条件的要进行量值比对。

  对于组分单一、纯度较高的对照品定值可以考虑等当量换算、精密度高、操作简便快速的容量法,以与质量平衡法相互验证。可根据对照品分子中所具有的官能团及其化学性质,选用不同的容量分析方法,但应符合如下条件:

  ①反应按一个方向进行完全。

  ② 反应迅速,必要时可通过加热或加入催化剂等方法提高反应速度。

  ③共存物不得干扰待测物反应,或能用适当方法消除。

  ④确定等当点的方法要简单、灵敏。

  ⑤ 标化滴定液所用基准物质易得,并符合纯度高、组成恒定且与化学式符合、性质稳定( 标定时不发生副反应) 等要求。

  3.对照品的定值

  当用2种或2种以上不同原理方法进行对照品标定时,原则上应对每种定值方法进行系统的方法验证,研究不同原理的测量方法的精密度,对方法的系统误差进行估计。根据ISO 相关指南的要求,对标准物质定值时,应该充分考虑测量误差的存在,建立不确定度的概念。我国的药典用对照品,由于制定药典质量标准时已经考虑了方法的精密度以及由于标准物质带来的不确定度,所以中国食品药品检定研究院提供的对照品均未把不确定度作为标准物质的相关信息予以提供。在进行2个不同原理标定方法的结果合并计算时,如果2个标定结果差异较大,其中至少1个结果是不准确的,此时2个结果不能合并计算;如果2个标定结果的平均值落在标定方法不确定度的交集部分,则可以合并计算,2个标定结果均值是真值的最优估计值。